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ecL化学发光液
EZECLplus化学发光液（增强型）用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统，可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)，极其节省抗体,可检测低于皮克级的蛋白，操作步骤无需进行特别优化。灵敏度高，信号持续时间长达5小时，不但适用于X射线胶片、也可用CCD或激光成像仪成像。
使用方法
1.执行常规SDS-PAGE、转膜、洗膜。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。
【注】：推荐将一抗浓度稀释到0.5μg/mL（0.05～1μg/mL均可），将二抗浓度稀释到0.02μg/mL（0.005～0.04μg/mL均可）。
2.后1次洗膜的同时，新鲜配制发光工作液，根据用量将两种组份按1:1比例混合均匀，备用。
【注】：（1）短时间暴露于日光灯下不会损害该工作液，但为获得合适结果，将此工作液保存在棕色瓶中，避免暴露于任何强光。（2）取A液和B液一定要用不同的枪头，工作液现配现用，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3.用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液（勿使膜完全干燥)。用移液器将工作液加到膜上（推荐1cm2膜加150μL发光液），使之充分接触。室温孵育5min，准备立即压片曝光。
4.用平头镊子夹起膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不可使膜完全干燥。
5.在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
6.在黑暗中将X感光胶片放置在包裹的保鲜膜上，根据蛋白浓度曝光适当时间（根据光强度需摸索曝光时间，一般30s-2min），显影冲洗。
【注】：根据经验，如果背景过高，可使用两张X感光胶片同时压片。
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2022-05-19 |
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